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產(chǎn)品名稱:線粒體提取試劑盒

產(chǎn)品型號:SM0020

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):亞細(xì)胞器提取試劑盒線粒體提取試劑盒
貨號:SM0020
規(guī)格:50T/100T
保存:四周內(nèi)使用可 4℃儲存,長期保存請置于-20℃

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SM0020線粒體提取試劑盒的詳細(xì)資料:

線粒體提取試劑盒
貨號:SM0020
規(guī)格:50T/100T
保存:四周內(nèi)使用可 4℃儲存,長期保存請置于-20℃


產(chǎn)品內(nèi)容:

組份 SM0020 -50SM0020-100
Lysis Buffer50 ml100 ml
Mito-Wash Buffer25 ml50 ml
Store Buffer5 ml10 ml


產(chǎn)品簡介:
    用于從動物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。


操作步驟:
1. 樣本處理
   a. 組織勻漿:稱取 100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織 20 次;
   b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800g離心 5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要 5×10 7 個(gè)細(xì)胞,加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨 30~40 次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000g 離心 5 min。
3. 取上清,轉(zhuǎn)移新的離心管中,4℃,1000g 再次離心 5 min。
4. 取上清,轉(zhuǎn)移新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心 10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入 0.5 mL Wash Buffer 重懸線粒體沉淀,4℃,1000 g 離心 5 min。
6. 取上清,轉(zhuǎn)移新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心 10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底。
7. 用 50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。

 

注意事項(xiàng):
    1. 為保證獲得完整的線粒體,務(wù)必做到:*,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
    2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此計(jì)算離心速度。
    3. 進(jìn)行Western Blot和 2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
       轉(zhuǎn)速與離心力換算:
       G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
       G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示;
       [rpm]2 即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。


相關(guān)產(chǎn)品:

P1020 1×PBS , PH7.2-7.4 , 0.01M
P1015 4× 蛋白上樣緩沖液(含 DTT )
SN0020 細(xì)胞核提取試劑盒

 

線粒體提取試劑盒

 相關(guān)同類產(chǎn)品:

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