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產(chǎn)品名稱:脯氨酸含量測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):脯氨酸含量測(cè)定試劑盒
Pro 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,逆境條件下,植物體內(nèi)Pro 含量顯著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標(biāo)之一。

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脯氨酸含量測(cè)定試劑盒的詳細(xì)資料:

脯氨酸含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法 :BC0290 :50T/48S
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:4℃保存。(自備)
試劑二:液體45 mL×1瓶, 4℃保存。
試劑三:4℃保存。(自備)
標(biāo)準(zhǔn)品:脯氨酸 10mg,4℃保存。
脯氨酸(Pro)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,逆境條件下,植物體內(nèi)Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標(biāo)之一。
用磺基水楊酸(SA)提取Pro,加熱處理后,Pro與酸性茚三酮溶液反應(yīng)生成紅色;加甲苯萃取后,在520nm測(cè)定吸光度。
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研缽、冰和蒸餾水。
一、脯氨酸含量測(cè)定試劑盒樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)胞、細(xì)菌或組織樣品的制備 :
細(xì)菌或細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清;按照每100萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),之后置沸水浴振蕩提取10min;10000g,常溫離心10min,取上清,冷卻后待測(cè)。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;之后置沸水浴振蕩提取10min,10000g,常溫離心10min,取上清,冷卻后待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:取100μL血清(漿)加入1mL提取液,充分混勻,之后置沸水浴振蕩提取10分鐘,10000g,常溫離心10分鐘,取上清,冷卻后待測(cè)。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的處理:稱取1mg,將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
二、測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)520nm,蒸餾水調(diào)零。
2、取0.5mL上清液(或稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品)+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中,置沸水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),每10min振蕩一次。
3、待冷卻后,在試管中加入1mL試劑三,振蕩30s,靜置片刻,使色素轉(zhuǎn)試劑三;吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中,用試劑三調(diào)零,于520nm波長(zhǎng)處比色,記錄吸光值。
4、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值和濃度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
三、Pro含量計(jì)算:
1、通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品脯氨酸含量(y為脯氨酸含量,μg/mL;x為OD值)
2、按照細(xì)菌、細(xì)胞個(gè)數(shù)或者組織鮮重計(jì)算,先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值:
細(xì)胞或細(xì)菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷細(xì)胞濃度(104 cell/mL)
Pro含量(μg/g mass) =y÷樣本鮮重(g/mL)
3、血清(漿)中脯氨酸含量,先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值:
Pro含量[μg/mL血清(漿)] = y÷0.1mL血清(漿)/mL 提取液中含有蛋白沉淀劑,提取的上清液不能用于蛋白濃度的測(cè)定。

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