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產品名稱:乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

產品型號:BC0415

產品報價:

產品特點:乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法
測定意義:ACC在生物體內催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A,是脂肪酸和許多次生代謝產物合成的關鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
測定原理:ACC能夠催化乙酰輔酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰輔酶A、ATP和無機磷,通過鉬酸銨定磷法測定無機磷的增加量來測定ACC活性。

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BC0415乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法的詳細資料:

乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

樣本的前處理

1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長 660nm,蒸餾水調零。

2、 酶促反應試劑的配制和預熱:在試劑二瓶中加入 2.5mL 試劑一,充分溶解混勻;在試劑三瓶中加入 2mL 蒸餾水,充分溶解混勻;將試劑一、二、三在 37℃(哺乳動物)或 25℃ (其它物種)預熱 10 分鐘。

3、定磷試劑的配制:按 H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑 應為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。注意:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

4、0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將試劑七 20 倍稀釋,即取 0.5mL 試劑七加 9.5 蒸餾水,充分混勻。

乙酰輔酶A羧化酶試劑盒 微量法

ACC 活性計算: 1、按組織蛋白濃度計算:定義:每小時每毫克組織蛋白產生 1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。 ACC (μmol/h/mg prot)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷ (V 樣×Cpr)÷T=10×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷Cpr 2、按樣本鮮重計算:定義:每小時每 g 組織產生 1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。 ACC (μmol/h /g 鮮重)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 總÷ (W× V 樣÷V 樣總)÷T=10×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W 3、 按細菌或細胞密度計算:定義:每小時每 500 萬細菌或細胞產生 1μmol 無機磷的量為一個 ACC 活力單位。 ACC (U/104 cell)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 總÷ (500× V 樣÷V 樣總)÷T=0.02×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) C 標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V 總:酶促反應總體積,0.1mL;V 樣:加入樣本體積,0.01mL ;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,0.5 小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。

ACC 能夠催化乙酰輔酶 A、NaHCO3和 ATP 生成丙二酰輔酶 A、ATP 和無機磷,通過鉬酸銨定磷法測定無機磷的增加量來測定 ACC 活性。

 

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