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產(chǎn)品名稱:X-gal(20mg/ml)基因工程

產(chǎn)品型號:X1010-1

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:X-gal(20mg/ml)基因工程
20mg/ml,DMF溶解
保存條件:-20℃避光保存。

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X1010-1X-gal(20mg/ml)基因工程的詳細資料:

X-gal(20mg/ml)基因工程

X-gal溶液(20mg/ml)    此產(chǎn)品為X-gal用DMF溶解過濾后配成的溶液。

X-gal(20mg/ml)基因工程使用方法:

在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中,加入200 μl的上述溶液、40 μl的IPTG(200mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培養(yǎng)基(實際上X-gal和IPTG可以直接涂抹在平板培養(yǎng)基表面,干半小時后就可以用,90mM的平板,X-gal(20mg/ml)涂40ul,IPTG涂7ul。150mm的板加倍)??筛鶕?jù)長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。

細菌藍白斑篩選原理:IPTG為安慰型誘導物,可誘導β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍色的物質(zhì):5-溴-4-靛藍,有色物質(zhì)可使所在的菌落呈現(xiàn)藍色。但當含有l(wèi)ac啟動子的質(zhì)粒中插入了外源基因,則不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal產(chǎn)生藍色底物,所在的菌落呈現(xiàn)白色(相對藍色),這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株。藍白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時的工作量。

使用濃度:IPTG濃度:50mg/ml;X-gal濃度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培養(yǎng)基上,同時滴加50~100l無菌水或無菌LB,用涂布棒涂抹均勻,放表面無水后即可使用。

預制板:倒板時,在溫度降50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混勻后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal對光敏感,含有X-gal的平板應(yīng)該避光保存,在1~2周內(nèi)使用;

3、過夜培養(yǎng)后藍白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中,一段時間后藍白斑顯示會比較明顯,便于挑選

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