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產(chǎn)品名稱:Solarbio-去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒

產(chǎn)品型號:D1140-50

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:Solarbio-去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。

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D1140-50Solarbio-去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒的詳細資料:

貨號名稱規(guī)格價格
D1140-50去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒50T280.00
D1140-100去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒100T380.00

Solarbio-去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。 Solarbio公司研制的內(nèi)毒素清除劑,可大限度地除去內(nèi)毒素。從1-5ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取5-15μg高純度質(zhì)粒DNA,提取率達85-90%。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA純度高,可直接用于細胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實驗,以及其他各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液P1在使用前先將試劑盒中提供的RNaseA全部加入,混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
操作步驟:
1、取1-5ml細菌培養(yǎng)物,12000rpm離心1min,吸除上清(菌液濃度較低時可多次離心收集到一個離心管中)。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入200μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會影響裂解導致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入200ul溶液P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細菌基因組DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過5 min,以免質(zhì)粒受到破壞。
4、向離心管中加入200ul溶液P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm
離心10 min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液P3加入后應立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
5、加入上清1/5體積的冰上預冷的內(nèi)毒素清除劑,振蕩混勻,溶液變渾濁,冰浴2min溶液變清亮。
6、37℃水浴5min,不時振蕩,溶液又變渾濁。12000rpm室溫離心5min,溶液應分為兩相,上層水相含質(zhì)粒DNA,下層油相含內(nèi)毒素。
7、將含質(zhì)粒DNA的上層水相轉(zhuǎn)移新管,棄下層油相,注意不要吸入油狀相。重復步驟5-7三次。
8、加入600ul的結(jié)合液,充分混勻后加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。
9、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
11、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
12、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。
13、為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

Solarbio-去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒
注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液P2、P3和結(jié)合液是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。
2. 洗脫緩沖液體積不應少于50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,以防DNA降解。
3. 質(zhì)粒DNA濃度>1mg/ml時清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒DNA本身的性質(zhì),清除過程可導致部分質(zhì)粒DNA丟失,但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。
4. 所有溶液應用無內(nèi)毒素的高純水配制,所有器械材料均應不含內(nèi)毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。
5. DNA濃度及純度檢測:得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。


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