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基因組DNA提取試劑盒簡(jiǎn)介：

DNA是遺傳信息的載體，是重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，為了進(jìn)行測(cè)序、雜交、基因表達(dá)、文庫(kù)構(gòu)建等試驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中提取試劑盒，如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高，片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來(lái)進(jìn)行不同樣品的抽提。
基因組DNA提取的原則：
1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性(因?yàn)檫z傳信息全部?jī)?chǔ)存在核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)中，故完整的一級(jí)結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ))。
2、排除其它分子(如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機(jī)溶劑等)的污染，使下游試驗(yàn)順利進(jìn)行?；蚪MDNA提取的原理和方法：DNA與組蛋白構(gòu)成核小體，核小體纏繞成中空的螺旋管狀結(jié)構(gòu)，即染色絲，染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于細(xì)胞核中，外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個(gè)細(xì)胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色體釋放出來(lái)，同時(shí)去除與DNA結(jié)合的組蛋白及非組蛋白。
1、樣品預(yù)處理
從各種不同來(lái)源的樣品(如細(xì)菌、酵母、血液、動(dòng)植物組織細(xì)胞等)中提取高純度的基因組DNA，因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其成分不同，樣品預(yù)處理方式也不同，以下簡(jiǎn)單介紹常用提取材料的預(yù)處理方式，若需詳細(xì)了解，請(qǐng)參考本公司各試劑盒說(shuō)明書(shū)。
部分樣品預(yù)處理方式:
植物材料  液氮研磨

動(dòng)物材料   勻漿、液氮研磨

培養(yǎng)細(xì)胞   蛋白酶K處理
細(xì)菌      溶菌酶破壁
酵母      破壁酶破壁、玻璃珠研磨
血液      紅細(xì)胞裂解液去紅

2、細(xì)胞裂解
CTAB法：適用于植物組織、真菌等。
CTAB是一種陽(yáng)離子去污劑，可溶解細(xì)胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核
酸分離出來(lái)。
SDS法：適用于細(xì)菌、血液、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等。SDS是一種陰離子去污劑，可溶解細(xì)胞膜，裂解細(xì)胞，使蛋白質(zhì)變性、染色體解體。

其它裂解方法：
物理方式：機(jī)械剪切、超聲波破碎、研磨勻漿等
化學(xué)方式：異硫氰酸胍、堿裂解等
酶法：蛋白酶K

3、DNA分離純化
純化要求：核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶(如核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶等)有抑制作用的成分。其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、多酚和脂類分子等污染應(yīng)降低到低程度。排除其它核酸分子的污染，
如提DNA時(shí)應(yīng)去除RNA，反之亦然。
純化方法：細(xì)胞破碎后，常使用吸附材料結(jié)合方法去除雜質(zhì)和純化DNA，主要有硅基質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂和磁珠等。因硅基質(zhì)材料可特異吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需要使用有毒溶劑如酚、氯仿等，使得提取基因組像過(guò)濾一樣簡(jiǎn)單，因此硅基質(zhì)材料成為大規(guī)模分離純化DNA的通用方法。硅基質(zhì)材料吸附核酸的原理：主要利用DNA在高鹽低pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料相結(jié)合，在低鹽高pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料脫離的特征。其機(jī)理可能是高濃度鹽離子破壞了硅基質(zhì)水分子結(jié)構(gòu)，形成陽(yáng)離子橋，當(dāng)鹽被清除后，再水化的硅石破壞了基質(zhì)和DNA之間的吸引力，因而DNA從硅基質(zhì)上被洗脫下來(lái)。
注意事項(xiàng)：盡量簡(jiǎn)化操作步驟，縮短提取過(guò)程，以減少各種有害因素對(duì)核酸的破壞。

減少化學(xué)物質(zhì)對(duì)DNA的降解，為避免過(guò)酸、過(guò)堿對(duì)DNA雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH值4.0-10.0的條件下進(jìn)行。防止基因組DNA的生物降解，主要是DNase降解基因組DNA，DNase需二價(jià)金屬陽(yáng)離子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金屬離子螯和劑螯和Mg2+以抑制DNase的活性。減少物理因素對(duì)DNA的降解，物理降解因素主要包括機(jī)械剪切力(如劇烈振蕩、攪拌等)，細(xì)胞突然置于低滲液中導(dǎo)致的細(xì)胞爆炸式破裂，DNase大量釋放，樣品反復(fù)凍融和高溫等。

4、DNA洗脫收集
DNA的洗脫效率取決于以下重要因素：
洗脫液成分：采用硅基質(zhì)膜吸附的DNA，可將DNA在低鹽高pH值條件下洗脫下來(lái)。pH值在7.0-8.5之間洗脫效率較高，pH值低于7.0則洗脫效率很低。一般基因組提取試劑盒中的洗脫緩沖液就TE(pH8.0)，既為DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫下來(lái)提供良好的pH環(huán)境，其中的EDTA又能保證DNA不被DNase降解，同時(shí)由于EDTA濃度非常低，對(duì)核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶的影響非常微弱，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，可放心使用。
洗脫液體積：當(dāng)洗脫液體積小于30ul時(shí)，洗脫效率很低且不穩(wěn)定；當(dāng)洗脫液體積在50-200ul時(shí)，洗脫效率穩(wěn)定在80-90﹪，并可保證得到大產(chǎn)量，因此洗脫液體積不能小于30ul。