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羥自由基清除能力測(cè)定試劑盒

羥自由基清除能力測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品說(shuō)明:羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)等生物分子,造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,在抗氧化類(lèi)保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。 H2O2/ Fe2+ 通過(guò) Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為 Fe3+ ,導(dǎo)致 536nm 吸光度下降,樣品對(duì) 536nm 吸光度下降速率的抑制程度,反映了樣品清除羥自由基的能力。

操作步驟:

一、 樣品的制備:

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測(cè)定。

3. 提取物(或者藥物)可配制成一定濃度,如 5 mg/mL。

二、 操作步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 536nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表空白管 對(duì)照管 測(cè)定管試劑一(μL) 30 30 30

試劑二(μL) 80 80 80

試劑三(mL) 20 20 20 立即混勻,防止局部顏色過(guò)濃樣品(μL) 50 試劑四(μL)

20 20 H2O(μL) 70 50 混勻 37℃,60min,于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定 536nm 處吸光值,空白管、對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值分別記為 A 空、A 對(duì)和 A 測(cè)。 注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式:羥自由基清除率 D% =(A 測(cè)-A 對(duì))÷(A 空-A 對(duì))×100% A 空、A 對(duì)、A 測(cè):空白管、對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值。注意事項(xiàng):為了比較不同樣品羥自由基清除能力,對(duì)于同一批樣品必須加入等量的樣品,血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積,提取物(或者藥物)配制成同樣濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容:標(biāo)準(zhǔn)液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。試劑三:

液體 3mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。

 

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