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活性氧檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備說明
活性氧檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備說明
  試劑準(zhǔn)備:
  1. DCFH-DA可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。血清或培養(yǎng)基顏色并不影響DCFH-DA及細(xì)胞內(nèi)熒光產(chǎn)生,但可能會影響熒光顯微鏡觀察,干擾熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀熒光測定。可將DCFH-DA稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如PBS中。這依賴于使用何種熒光設(shè)備進(jìn)行測定。
  2. 加入DCFH-DA的時機(jī)或孵育時間,以終能順利檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧為目的。藥物處理時間較短(<2小時)或預(yù)計(jì)ROS效應(yīng)較弱,可先加或同時加入DCFH-DA。反之,treat 刺激時間較長(>6 小時)或預(yù)計(jì)產(chǎn)生ROS效應(yīng)較強(qiáng),可后加DCFH-DA。
  3. 活性氧供體含高純度12 mM H2O2。加入細(xì)胞后其本身即是一種活性氧,而且在代謝過程中可產(chǎn)生其它類型的活性氧,均可使DCFH-DA氧化為DCF呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光。因而,用戶可使用該試劑作為測試實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)或儀器的陽性試劑,以初步觀察細(xì)胞活性氧所產(chǎn)生的熒光的一般特征,并且也可以將該實(shí)際作為實(shí)驗(yàn)的一個陽性對照。推薦該試劑的細(xì)胞工作濃度為20~100 uM或更低濃度,但超過200uM將產(chǎn)生細(xì)胞毒。如果用戶熟悉ROS熒光或?qū)嶒?yàn)沒有必要采用陽性對照,可以不加該試劑。

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